29/05/2021
La citometría de flujo es una técnica fundamental en biomedicina, con aplicaciones directas en el diagnóstico clínico, especialmente en hematología e inmunología. Su capacidad para analizar de manera rápida y precisa las características físicas y químicas de células individuales suspendidas en un líquido la convierte en una herramienta inigualable.
- Principios de la citometría de flujo
- Aplicaciones de la citometría de flujo en enfermedades malignas
- Aplicaciones de la citometría de flujo en hematopatías no malignas
- Interpretación de los gráficos de citometría de flujo
- Tabla comparativa de aplicaciones
- Lista de enfermedades detectadas por citometría de flujo
Principios de la citometría de flujo
Un citómetro de flujo consta de varios componentes clave. Una suspensión celular se introduce en un flujo líquido que ordena las células individualmente a alta velocidad. Este flujo pasa por un haz de luz láser (o varios láseres en equipos modernos), que induce fluorescencia en las células marcadas con fluorocromos. Los detectores recogen la luz emitida, la amplifican y la convierten en datos digitales. Los citómetros actuales pueden manejar simultáneamente múltiples detectores (6-10 o más). Estos datos se procesan en un ordenador para su posterior análisis.
La citometría de flujo permite medir parámetros intrínsecos (tamaño y complejidad celular) y extrínsecos (fluorescencia de marcadores). Los marcadores, habitualmente anticuerpos unidos a fluorocromos, permiten identificar distintos antígenos celulares. Gracias a la capacidad de medir múltiples parámetros simultáneamente, se pueden identificar y cuantificar subpoblaciones celulares con gran precisión.
Análisis de datos: La información generada se presenta de forma estadística. Se puede determinar el porcentaje de células que expresan un determinado marcador (positivas vs. negativas) o la intensidad media de fluorescencia, que indica la cantidad de marcador expresado (débilmente positivas, intensamente positivas).
Representación gráfica:
Los datos se suelen representar en gráficos de dispersión bidimensionales o multidimensionales. Un ejemplo típico es un gráfico donde se representa la complejidad celular (Scatter lateral) frente al tamaño celular (Scatter frontal). Subpoblaciones celulares se muestran como agrupaciones (clusters) en el gráfico. La adición de información de fluorescencia (de los diferentes marcadores) permite subdividir estas poblaciones según la expresión de los antígenos de interés.
Aplicaciones de la citometría de flujo en enfermedades malignas
Diagnóstico de Leucemias:
La citometría de flujo es esencial en el diagnóstico de leucemias agudas en niños, las neoplasias más frecuentes en esta población. Un aspirado de médula ósea, rica en células leucémicas, se analiza mediante paneles de anticuerpos que identifican marcadores específicos de linaje y maduración de los linfocitos B o T, o células mieloides. Esta información es crucial para el pronóstico y el tratamiento.
Enfermedad Mínima Residual (EMR):
La citometría de flujo permite cuantificar la EMR durante el tratamiento de leucemias. Se buscan marcadores específicos de la leucemia identificados en el diagnóstico inicial, que permitan diferenciar las células leucémicas de las sanas. La detección de niveles de EMR por encima de un umbral determinado puede indicar la necesidad de un tratamiento más intensivo o un trasplante de progenitores hematopoyéticos.
Características para la identificación de la EMR: Se utilizan diferentes características, tales como: aberración antigénica (expresión de un marcador inadecuado para el linaje), expresión asincrónica (expresión de un marcador en un estadio madurativo inapropiado), sobreexpresión antigénica (expresión de un marcador a niveles excepcionalmente altos), o fenotipo ectópico (expresión de un marcador ausente en la hematopoyesis normal).
Detección de células leucémicas en LCR:
La citometría de flujo muestra mayor sensibilidad que la citología convencional para la detección de células leucémicas en el líquido cefalorraquídeo (LCR).
Detección de metástasis:
La citometría de flujo puede identificar células tumorales metastásicas (ej., neuroblastoma) en muestras de médula ósea, facilitando la estadificación y el seguimiento del tratamiento.
Aplicaciones de la citometría de flujo en hematopatías no malignas
Inmunodeficiencias:
La citometría de flujo es una herramienta diagnóstica fundamental en inmunodeficiencias. La ausencia o disminución de poblaciones linfocitarias específicas (linfocitos T, B, células NK) se detecta fácilmente en análisis de sangre periférica. También permite detectar déficit en la expresión de marcadores como el HLA-DR.
Síndrome linfoproliferativo autoinmunitario:
Un alto porcentaje de linfocitos T dobles negativos (CD4-CD8-) es un criterio diagnóstico en este síndrome.
Ensayos funcionales:
Además de la cuantificación celular, la citometría de flujo permite realizar ensayos funcionales para evaluar la respuesta inmune, como la producción de citocinas.
Interpretación de los gráficos de citometría de flujo
La interpretación de los gráficos de citometría de flujo requiere experiencia y conocimiento. Se utilizan diferentes estrategias para analizar los datos, incluyendo la selección de puertas (gating) para aislar subpoblaciones celulares de interés. La correcta interpretación de la intensidad de fluorescencia y la distribución de las poblaciones celulares en los gráficos es esencial para obtener conclusiones diagnósticas y pronósticas precisas.
Consultas habituales: El análisis de los datos suele responder a preguntas como: ¿Qué porcentaje de células expresan un determinado marcador?, ¿Cuál es la intensidad media de fluorescencia de un marcador específico?, ¿Existen subpoblaciones celulares con características particulares?, ¿Cómo se comparan los resultados con los valores de referencia?
Tabla comparativa de aplicaciones
| Enfermedad | Aplicación de la citometría de flujo | Parámetros clave |
|---|---|---|
| Leucemias agudas | Diagnóstico, monitorización de EMR | Marcadores de linaje y maduración, marcadores leucémicos específicos |
| Linfomas | Diagnóstico, estadificación, monitorización de la respuesta al tratamiento | Marcadores de linaje, marcadores de activación |
| Inmunodeficiencias | Diagnóstico | Recuentos de subpoblaciones linfocitarias |
| Trasplantes de médula ósea | Monitorización del quimerismo | Marcadores de células donantes y receptoras |
| Enfermedades autoinmunes | Monitorización de la actividad de la enfermedad | Marcadores de activación de linfocitos |
Lista de enfermedades detectadas por citometría de flujo
La citometría de flujo puede contribuir al diagnóstico de una amplia gama de enfermedades hematológicas e inmunológicas, incluyendo:
- Leucemias agudas y crónicas
- Linfomas
- Mielomas
- Inmunodeficiencias primarias y secundarias
- Enfermedades autoinmunes
- Infecciones virales (ej. VIH)
- Enfermedades pulmonares intersticiales
- Trastornos de la coagulación
Conclusión: La citometría de flujo gráfica es una herramienta poderosa en el diagnóstico y seguimiento de diversas enfermedades. Su capacidad de analizar múltiples parámetros celulares proporciona información valiosa para el manejo clínico de pacientes.